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内部白云石实验万博外围LOL室:双乳剂FACS

新型生物制药的发展是快速增长的医药和生物制品市场的重要组成部分。虽然靶向生物疗法如酶、单克隆抗体等在癌症和其他疾病的治疗中表现出特异性和前景，但它们作为治疗手段缺乏必要的功能验证。

文库筛选与荧光活化细胞分选(FACs)相结合，提供了一种分析异质群体中细胞表面和细胞内分子表达的方法，一次分析一个细胞。主要是在分选过程中测量抗体与蛋白质、细胞表面标记物和配体结合而发出的荧光信号强度。传统的亚克隆方法可以对需要进一步优化的表面标记进行克隆，但该技术缺乏进行早期表型筛选所需的能力和吞吐量。

流式细胞仪利用含有蛋白表达所需所有成分的双乳状液对基因文库进行排序。A)一个基因在单个液滴中与反应混合b)基因变异在细菌中表达，然后每个液滴封装一个细胞。在这两种情况下，活性翻译酶与荧光底物相互作用产生荧光产物。然后使用FACS对其进行排序。

结合液滴的荧光检测还可以定量测量反应的进展和结果。微流体技术提供了一个生产单分散液滴的平台，这些液滴能够将生物细胞和分子包裹在纳米或微升体积内。这些微型生物反应器可以帮助驱动高通量筛选，执行多达10个7每次反应的成本大大降低1．液滴将单个细胞分隔开来，将所有分泌的分子和分析物都包裹起来，防止其他细胞和产物受到干扰。这些液滴可以根据一种或多种信号进行分类，并对其核酸含量进行分析，以确定引起活性的变异。换句话说，该技术可以提供基因型到表型连锁2．

在液滴中划分细胞是有益的一个主要例子是定向进化。将一系列随机突变引入目标基因中，通过在液滴中封装和FACS排序，可以选择所需的特性。从这些实验中获得的基因库的规模很容易超过任何筛选系统的吞吐量，这意味着筛选是序列空间探索的瓶颈3.．

在提供高通量能力方面，液滴微流体超过了目前的筛选系统。为了对液滴(油包水)进行FACS分类，周围的鞘套流体需要与FACS平台兼容。因此，液滴必须重新封装在水缓冲液中，形成双重乳化(水包油包水)4．万博外围LOLDolomite的µ封装系统提供了精确的解决方案，允许用户创建大小从1-70 μ m的液滴，与各种FACS喷嘴兼容。两步封装技术允许处理小样品体积(100 μ l)的时间，以适应使用稀有或珍贵的样品。

要了解更多信息，请参考我们的申请说明、协议和网络研讨会。或者，通过我们的触点形式或在info@万博外围LOLdolomite-microfluidics.com看看你如何可以使用双乳液来提高质量和吞吐量的分析!

  1. Sukovich, d.j.， Lance, s.t.， & Abate, a.r. (2017)利用流式细胞仪对DNA分子进行三维pcr序列特异性分选，科学报告、7、1 - 9
  2. A. Zinchenko, Devenish, S. R. A.， Kintses, B.， Colin, P.， M. & Hollfelder F. (2014)百万分之一:流式细胞分选单个细胞裂解液在单分散微细升双乳液滴的定向进化，分析化学, 86.5, 2526 - 33所示
  3. 范·塔滕霍夫-佩尔，R. J.，埃尔南德斯-瓦尔德斯，J. A.，托辛克，B.，柯伊伯斯，O. P.，费施莱希纳，M.， & &;巴赫曼,h (2020)微滴筛选和筛选促进微生物生产细胞外化合物，生物技术的现状, 61, 72 - 81
  4. Brower, K.K, Carswell-Crumpton, C.， Klemm, S.， Cruz, B.， Kim, G.， Calhoun, S.G.， Nichols, L. & Fordyce, P.M， (2020)双乳流式细胞仪高通量单滴分离和核酸回收芯片上的实验室20岁,2062 - 2074

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